→ Referencia proyecto: AGL2012-39965-C02-01/02

Resumen

La enzima succinato deshidrogenasa (SDH) se ha convertido en una prometedora diana molecular hacia la que han dirigido su atención las grandes empresas del sector agroquímico, como refleja el hecho de que 7 de los fungicidas desarrollados en los últimos años tengan como modo de acción la inhibición de la SDH. Entre estos nuevos productos ocupan un lugar destacado los fungicidas fluopyram, fluxapyroxad y penthiopyrad. El uso de estos nuevos fungicidas, actualmente en fase de introducción, se generalizará muy probablemente en los próximos años, lo que los convertirá en contaminantes químicos potenciales de productos hortofrutícolas. En este contexto, disponer de métodos rápidos de análisis que complementen los procedimientos más habituales basados en métodos cromatográficos será de gran ayuda para garantizar la calidad y la seguridad de los alimentos.

Es precisamente en esta línea en la que se ha enmarcado el objetivo principal del presente proyecto de investigación, en el que se han desarrollado nuevos procedimientos específicos, rápidos y fáciles de usar, basados en métodos inmunoquímicos, para el análisis de fungicidas SDH en productos hortofrutícolas. Como paso previo para el desarrollo de estos sistemas ha sido necesario generar los correspondientes inmunorreactivos (haptenos, funcionalizados, conjugados fungicida-proteína y anticuerpos) específicos para cada uno de los tres fungicidas abordados en el proyecto. Combinando adecuadamente anticuerpos y conjugados de ensayo ha sido posible desarrollar métodos rápidos de análisis basados en la técnica ELISA capaces de determinar con elevada sensibilidad (muy por debajo de los límites máximos establecidos) y selectividad cada uno de los compuestos diana en diferentes alimentos (frutas de hueso, uvas, zumos y vino).

Adicionalmente, en el proyecto también se ha llevado a cabo la evaluación de nuevos nanomateriales como vehículos inmunizantes. Para ello se han preparado inmunógenos a partir de nanotubos de carbono de pared múltiple (MWNT) con diferentes características morfológicas y funcionalizados superficialmente para posibilitar el anclaje covalente de conjugados proteína-hapteno o los propios haptenos. Se ha demostrado que estos constructos son capaces de desencadenar una respuesta inmune secundaria equivalente en calidad y cantidad a la obtenida con conjugados tradicionales,  incluso empleando dosis de hapteno hasta 300 veces menores de lo habitual. Además, se ha observado que la inmunización con MWNTs resultan más inocua para los animales, y que estos nanomateriales poseen cierto carácter adyuvante siempre que su funcionalización se realice con conjugados proteicos.